钙离子荧光探针Fura8FF , AM

具有细胞渗透性的 Fura-8FF AM 是 Fura-8 AM 的类似物，具有低得多的钙结合亲和力，Kd ~10 µM。 Fura-8FF 的发射转移到与常见滤光片组兼容的更长可见波长。 Fura-8FF™ AM 对钙比 Fura-2FF AM 更敏感，信号/背景比比 Fura-2FF AM 更高。即，通过检测530 nm 处的发射强度来计算 354 nm 和 415 nm 处的激发强度比。

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溶解方案(溶剂以说明书为准)

实验方案

储备溶液配制

在高质量无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Fura-8FF 储备溶液。

工作溶液配制

Fura-8FF工作溶液
1.实验当天，将 Fura-8FF 溶解在 DMSO 中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Fura-8FF 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Fura-8FF。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Fura-8FF 的水溶性。可以从百萤购买各种 Pluronic® F-127 解决方案。
注：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后探针的泄漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天，将 1X Fura-8FF 工作溶液添加到细胞板中。
注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
注：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂，并使用配备 Fura-8FF 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如 FlexStation）的荧光酶标仪同时测量荧光

试剂应用文献

参考文献