AF488酸 相当于Alexa Fluor 488酸
| Ex (nm) | 499 | Em (nm) | 520 |
| 分子量 | 648.49 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
AF488酸与AlexaFluor®488酸的分子相同（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）。它是一种明亮的黄色荧光染料，适合与488 nm氩激光线一起使用。AF488染料在pH 4至pH 10下具有水溶性和pH不敏感性。AF488是将这种染料与肽结合的经济的胺反应形式。
操作方案
标记寡核苷酸
1.准备以下试剂：
200mMTHPTA [tris（3-羟丙基三唑基甲基）胺]水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃修饰的低聚水溶液（尽可能浓缩，例如> 10 mg / mL）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）
2.在反应前将CuSO4与THPTA以1：2的比例混合并充分涡旋几分钟。该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃改性的低聚物溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为2-5当量）。
4.加入5当量的THPTA / CuSO4工作溶液（来自步骤1）。
5.加入10-30当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.乙醇通过所需方法（例如HPLC）沉淀或纯化寡聚物。
标记肽
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃修饰肽水溶液或DMF溶液（取决于您的肽溶解度，如果可能，> 10 mg / mL）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃修饰的肽溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。
4.加入5-10当量的THPTA / CuSO4。
5.加入10-20当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.通过HPLC纯化您想要的肽。
标记炔烃有机小分子
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃化合物水溶液或DMF溶液（取决于您的化合物溶解度，如果可能，> 10mg / mL，）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。当冷冻时，该溶液可稳定数周。
3.向炔烃溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。
4.加入25当量的THPTA / CuSO4。
5.加入50当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌反应混合物30-60分钟。
7.通过色谱或其他方法纯化您想要的分子。
标记生物聚合物
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃改性的水中生物聚合物（尽可能浓缩，例如> 5毫克/毫升）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃改性的生物聚合物溶液中加入过量的染料叠氮化物（负载比：5-20染料叠氮化物/炔烃）。
4.加入5摩尔当量（参考染料叠氮化物）的THPTA / CuSO 4。
5.加入10当量的抗坏血酸钠（参见染料叠氮化物）。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.通过凝胶过滤或透析纯化您想要的分子。
标记细胞，细胞裂解物或生物样品
1.准备以下试剂：
水性缓冲液或100mM THPTA配体水溶液
20mM CuSO4水溶液
300mM抗坏血酸钠水溶液
2.5mM炔烃或叠氮化物标记试剂水溶液或DMSO溶液
2.对于每个叠氮化物或炔烃修饰的细胞或细胞裂解物样品，将以下试剂加入1.5 mL微量离心管中，然后短暂涡旋混合。
50μL细胞或细胞裂解液样品
50μLPBS缓冲液
50μL5mM相应的染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烃）检测试剂
3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暂涡旋混合。
4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暂涡旋振荡。
5.加入10μL300mM抗坏血酸钠溶液以引发点击反应，短暂涡旋混合。
6.保护点击反应不受光照，使其在室温下孵育30分钟。
7.点击标记细胞或细胞裂解物并准备用于下游处理和/或分析。
参考文献
Development of new hCaM-Alexa Fluor(R) biosensors for a wide range of ligands
Authors: Velazquez-Lopez, I.; Leon-Cruz, E.; Pardo, J. P.; Sosa-Peinado, A.; Gonzalez-Andrade, M.
Journal: Anal Biochem (2017): 13-22
Synthetic Protocol for AFCS: A Biologically Active Fluorescent Castasterone Analog Conjugated to an Alexa Fluor 647 Dye
Authors: Winne, J. M.; Irani, N. G.; Van den Begin, J.; Madder, A.
Journal: Methods Mol Biol (2017): 21-Sep
Alteration of AMPA Receptor-Mediated Synaptic Transmission by Alexa Fluor 488 and 594 in Cerebellar Stellate Cells
Authors: Maroteaux, M.; Liu, S. J.
Journal: eNeuro (2016)
Alexa fluor-labeled fluorescent cellulose nanocrystals for bioimaging solid cellulose in spatially structured microenvironments
Authors: Grate, J. W.; Mo, K. F.; Shin, Y.; Vasdekis, A.; Warner, M. G.; Kelly, R. T.; Orr, G.; Hu, D.; Dehoff, K. J.; Brockman, F. J.; Wilkins, M. J.
Journal: Bioconjug Chem (2015): 593-601
A mouse monoclonal antibody against Alexa Fluor 647
Authors: Wuethrich, I.; Guillen, E.; Ploegh, H. L.
Journal: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother (2014): 109-20
In vivo visualization of GL261-luc2 mouse glioma cells by use of Alexa Fluor-labeled TRP-2 antibodies
Authors: Fenton, K. E.; Martirosyan, N. L.; Abdelwahab, M. G.; Coons, S. W.; Preul, M. C.; Scheck, A. C.
Journal: Neurosurg Focus (2014): E12
Green tea catechins quench the fluorescence of bacteria-conjugated Alexa fluor dyes
Authors: Zhao, L.; Li, W.; Zhu, S.; Tsai, S.; Li, J.; Tracey, K. J.; Wang, P.; Fan, S.; Sama, A. E.; Wang, H.
Journal: Inflamm Allergy Drug Targets (2013): 308-14
Volume labeling with Alexa Fluor dyes and surface functionalization of highly sensitive fluorescent silica (SiO2) nanoparticles
Authors: Wang, W.; Nallathamby, P. D.; Foster, C. M.; Morrell-Falvey, J. L.; Mortensen, N. P.; Doktycz, M. J.; Gu, B.; Retterer, S. T.
Journal: Nanoscale (2013): 10369-75
Fluorescence of Alexa fluor dye tracks protein folding
Authors: Lindhoud, S.; Westphal, A. H.; Visser, A. J.; Borst, J. W.; van Mierlo, C. P.
Journal: PLoS One (2012): e46838
a Luo-acupoint) in the rat: a double-labeling study of cholera toxin subunit B conjugated with Alexa Fluor 488 and 594]
Authors: Cui, J. J.; Zhu, X. L.; Ji, C. F.; Jing, X. H.; Bai, W. Z., [Neuroanatomical basis of clinical joint application of "Jinggu" (BL 64, a source-acupoint) and "Dazhong" (KI 4
Journal: Zhen Ci Yan Jiu (2011): 262-7
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