Amplite 荧光法次氯酸检测试剂盒

Amplite 荧光法次氯酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测次氯酸的试剂盒，次氯酸阴离子 (ClO-) 及其质子化形式次氯酸 (HClO) 是生物系统中关键的活性氧 (ROS)。次氯酸盐（次氯酸）的产生不受控制会导致组织损伤和疾病，包括关节炎、肾衰竭和癌症。此外，次氯酸钠（NaClO）已广泛用作我们日常生活中的表面清洁、除臭和水消毒的漂白剂。接触大量次氯酸钠会导致中毒，症状包括严重呼吸困难、胃部刺激、皮肤和眼睛发红和疼痛。因此，次氯酸盐（次氯酸）的高选择性和灵敏检测具有毒理学和环境重要性。 Amlite® 荧光次氯酸盐（次氯酸）检测试剂盒提供了一种灵敏的基于荧光的检测方法，用于高特异性地测量次氯酸盐（次氯酸）。与次氯酸盐（次氯酸）选择性反应后，弱荧光 Oxirite™ 次氯酸盐传感器会生成强荧光产物，使荧光增强超过 100 倍。荧光信号可以通过荧光酶标仪测量。使用此荧光次氯酸盐（次氯酸）测定试剂盒，可在 100 µL 反应体积中检测到低至 0.4 µM 的次氯酸盐。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法次氯酸检测试剂盒。 

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适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备次氯酸盐工作溶液（50 µL）
2.添加次氯酸盐标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光强度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Oxirite 次氯酸盐传感器储备溶液（200X）：
将50 µL DMSO（组分D）添加到Oxirite 次氯酸盐传感器（组分A）的小瓶中，制成200X储备溶液。 避光。

 

2.标准溶液配制

次氯酸盐标准
将50 µL次氯酸盐标准溶液（组分C）添加到450 µL测定缓冲液（组分B）中，得到100 mM次氯酸盐标准溶液（H7）。 取100 mM（H7）次氯酸盐标准溶液，并在测定缓冲液（组分B）中进行1:10系列稀释，以得到10、1、0.1和0.01 mM系列次氯酸盐标准品（H6-H3）。 然后，使用0.01 mM次氯酸盐标准品（H3），并在测定缓冲液（组分B）中进行1：3的比例，以得到0.003和0.001 mM的次氯酸盐标准品稀释液（H2-H1）。

 

3.工作溶液配制

将25 µL 200X Oxirite 次氯酸盐传感器储备溶液添加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成次氯酸盐工作溶液。 注意：这种次氯酸盐工作溶液足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

 

样品操作及实验分析

表1. 96孔黑色实心微孔板中次氯酸盐标准品和测试样品的布局。 H =次氯酸盐标准品（H1-H7，0.001至100 mM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
H1	H1	...	...
H2	H2	...	...
H3	H3
H4	H4
H5	H5
H6	H6
H7	H7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
H1-H7	50ul	连续稀释液（0.001至100 mM）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备次氯酸盐标准品（H），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL次氯酸盐工作溶液添加到次氯酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使次氯酸盐总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL次氯酸盐工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处监视荧光的增加。

 

参考文献

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Amplite 比色法次氯酸检测试剂盒	Cat#13845