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Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒

英文名称:Amplite® Colorimetric Oxaloacetate Assay Kit *Red Color*
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测草酰乙酸的试剂盒,草酰乙酸是柠檬酸循环的重要组成部分,它与乙酰辅酶A反应生成柠檬酸盐。它还涉及糖异生,尿素循环,乙醛酸循环,氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖原异生和尿素循环功能,并且可以导致能量产生减少。草酰乙酸也可用作血液谷氨酸剂,在创伤性脑损伤后提供神经保护,表现为海马神经元损失减少和神经功能。Amplite 比色草酰乙酸检测试剂盒提供了一种灵敏的检测方法,用于定量生物样品中的草酰乙酸。草酰乙酸转化为丙酮酸,通过酶偶联反应产生过氧化氢。用吸光度酶标仪在575nm处用Amplite Red监测过氧化氢的产生。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 575nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

96孔板测定示例

概述

准备测试样品(50μL)和连续稀释的草酰乙酸标准品(50μL)

加入等体积的测定混合物(50μL)

在室温下孵育30分钟至1小时

监测575nm处的吸光度强度

注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备连续稀释的草酰乙酸标准品和测试样品:

1.1将100μLDdH2O加入到草酰乙酸盐标准小瓶(组分E)中以制备100mM草酰乙酸标准溶液。

1.2制备草酰乙酸标准稀释液:将10μL100mM草酰乙酸盐(来自步骤1.1)加入990μL测定缓冲液(组分C)中,得到1mM草酰乙酸溶液。 将320μL的1mM草酰乙酸标准溶液加入680μL测定缓冲液中以制备320μM草酰乙酸溶液。 进行1:2连续稀释,得到160,80,40,20,10,5μM连续稀释的草酰乙酸标准品。

1.3根据说明书中的表1,将50μL含草酰乙酸的样品和连续稀释的草酰乙酸标准品加入透明底96孔微量培养板中。

 

2.准备草酰乙酸测定混合物:

2.1Make Amplite 红色底物原液(200X):将50μLDMSO(组分F)加入Amplite Red底物(组分A)中,制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制备草酰乙酸脱羧酶(OAC)储备溶液(100X):将50μLddH2O加入草酰乙酸脱羧酶(组分D)中以制备100×草酰乙酸脱羧酶原液。

2.3制备测定混合物:将5mL测定缓冲液(组分C)加入一个酶混合瓶(组分B)中充分混合。 将50μLOAC储备溶液(来自步骤2.2)和25μL200XAmplite Red储备溶液(来自步骤2.1)转移到瓶中并充分混合。

注意1:分析混合物不稳定,及时使用,避免直接暴露在光线下。

注意2:将未使用的200X Amplite Red原液储存在-20℃,避免光照和反复冻融循环。

 

3.运行草酰乙酸测定:

3.1将50μL测定混合物(来自步骤2.3)添加到草酰乙酸标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤1.3),以使总草酰乙酸测定体积为100μL/孔。

注意1:对于384孔板,每孔加入25μL样品,25μLAssay混合液。

注意2:在pH 6.5至7.0下进行草酰乙酸测定。

3.2在室温下孵育反应混合物30分钟至1小时。

3.3使用575 nm的吸光度读板仪检测吸光度的增加。

 

参考文献

Enzymatic assay for D-aspartic acid using D-aspartate oxidase and oxaloacetate decarboxylase
Authors: Kato S, Ikuta T, Hemmi H, Takahashi S, Kera Y, Yoshimura T.
Journal: Biosci Biotechnol Biochem (2012): 2150

Assay of blood and tissue oxaloacetate and alpha-ketoglutarate by isotope dilution gas chromatography-mass spectrometry
Authors: Laplante A, Comte B, Des Rosiers C.
Journal: Anal Biochem (1995): 580

Effect of oxaloacetate and phosphorylation on ATP-citrate lyase activity
Authors: Pentyala SN, Benjamin WB.
Journal: Biochemistry (1995): 10961

Novel oxaloacetate effect on mitochondrial Ca2+ movement
Authors: Leikin YN, Zharova TV, Tjulina OV.
Journal: FEBS Lett (1993): 35

A sensitive multienzymatic assay for the measurement of pyruvate, dihydroxyacetone phosphate, oxaloacetate, and acetoacetate in clear extracts from biological samples
Authors: Arias-Mendoza F, Pina E.
Journal: Prep Biochem (1991): 211

Flow-injection analysis of amino acids and their metabolites by immobilized vitamin B6-dependent enzymes. Sensitive determination of L-aspartate, L-glutamate, 2-oxoglutarate, and oxaloacetate
Authors: Kurkijarvi K, Vierijoki T, Korpela T.
Journal: Ann N Y Acad Sci (1990): 394

Pyruvate dehydrogenase activity in osmotically shocked rat brain mitochondria: stimulation by oxaloacetate
Authors: Haas RH, Thompson G, Morris B, Conright K, Andrews T.
Journal: J Neurochem (1988): 673

Activity of maize leaf phosphoenolpyruvate carboxylase in relation to tautomerization and nonenzymatic decarboxylation of oxaloacetate
Authors: Walker GH, Ku MS, Edwards GE.
Journal: Arch Biochem Biophys (1986): 489

Kinetic mechanism of Escherichia coli isocitrate dehydrogenase and its inhibition by glyoxylate and oxaloacetate
Authors: Nimmo HG.
Journal: Biochem J (1986): 317

The interaction of dithiothreitol and acetyl coenzyme A in a radiochemical assay for rat brain ATP:citrate oxaloacetate lyase
Authors: Simpson J.
Journal: J Neurochem (1981): 100

 

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