Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒
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Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒，乳酸是手性的并且具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。 在代谢和运动过程中，乳酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH）不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时非常有用。 D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内主要取决于肾脏排泄。 D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉类和鱼类。 D-和L-乳酸含量是食品的质量指标，如鸡蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。 血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中过度生长的反映。
AAT Bioquest的Amplite 乳酸盐检测试剂盒（L＃乳酸检测Cat＃13814和13815，D-lactate检测Cat＃13810和13811）提供荧光和吸光度检测方法，用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。 生物样品，如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品。 在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，其通过生色NADH传感器特异性监测。 通过吸光度酶标仪在~575nm或~A605nm的吸光度比下可以容易地读取信号，以提高测定灵敏度。 使用这种Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的D-乳酸。 它应用广泛，可以很容易地适用于需要测量D-乳酸的各种应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 575/605nm |
| 推荐孔板: | 透明底板 |
96孔板测定示例
概述
制备D-乳酸测定混合物（50μL）
加入D-乳酸标准品或测试样品（50μL）
在室温下孵育30分钟~2小时
监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加
注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。
操作方法
1.准备NAD储备溶液（100X）：
向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD储备溶液。
2.准备D-乳酸储备液：
将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到D-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。
注意：未使用的D-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。
3.准备D-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：
3.1将10μLD-乳酸储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM D-乳酸盐标准溶液。
注意：稀释的D-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
3.2取200μL的1mM D-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸标准品系列稀释液。
3.3如说明书中的表1和2中所述，将含有D-乳酸盐标准品和含D-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微量培养板中。
4.准备D-乳酸测定混合物：
4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。
4.2将50μLNAD储备液（100X，来自步骤1）加入组分A（来自步骤4.1）的瓶中，并且混合均匀。
注意：这种D-乳酸测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的D-乳酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。
5.运行D-乳酸测定：
5.1将50μLD-乳酸测定混合物（来自步骤4.2）添加到D-乳酸标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中，以使总D-乳酸测定体积为100μL/孔。
注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLD-乳酸测定混合物。
5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。
5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。
参考文献
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