Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒

Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，葡萄糖-6 - 磷酸（ G6P ）是用于葡萄糖到细胞转运的关键中间体。 G6P也可在肝脏和肌肉中转化为糖原或淀粉进行存储。 G6P是由葡萄糖-6 - 磷酸脱氢酶（ G6PD）用来生成在NADPH形式的还原当量。其中G6PD缺乏引起的溶血性贫血。 AAT Bioquest的Amplite 荧光葡萄糖-6 - 磷酸检测试剂盒提供了用于生物样品如血清，血浆，以及细胞培养样品中检测G6P一种简单，灵敏，快速的基于荧光的方法。在偶联酶测定中， 比例是专门由一个荧光NADPH传感器监测。荧光信号可以通过荧光酶标仪在EX/ EM = 530-570 nm/590-600纳米读取（建议EX / EM = 540 nm/590 nm建议）。Amplite G6P测定试剂盒，我们能够检测少至0.3 μM G6P在100微升反应体积。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板
光吸收酶标仪
吸收:	575/605nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备G6P工作溶液（50 µL）
2.添加G6P标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADP储备溶液（100X）：
在NADP小瓶（组分C）中加入100 µL H2O，制成100X NADP储备溶液。

1.2 G6P标准溶液（100 mM）：
将100 µL H2O或1x PBS缓冲液加到G6P标准品（组分D）的小瓶中，制成100 mM G6P标准品溶液。

 

2.标准溶液

G6P标准
将10 µL 100 mM G6P标准溶液加到990 µL 1x PBS缓冲液中，生成1 mM G6P标准溶液。 然后，将100 µL 1 mM G6P标准溶液添加到900 µL 1 x PBS缓冲液中，制成100 µM G6P标准溶液（G6P7）。 取100 µM G6P标准溶液（G6P7）并进行1：3连续稀释，以使用1x PBS缓冲液连续稀释G6P标准溶液（G6P6- G6P1）。注意：稀释的G6P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

 

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中，并充分混合。

3.2将50 µL 100X NADP储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成G6P工作溶液。 注意：此G6P工作溶液足以用于一个96孔板。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G6P标准品和测试样品的布局。 G6P = G6P标准品（G6P1-G6P7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
G6P1	G6P1	...	...
G6P2	G6P2	...	...
G6P3	G6P3
G6P4	G6P4
G6P5	G6P5
G6P6	G6P6
G6P7	G6P7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
G6P1-G6P7	50ul	连续稀释（0.14至100 µM）
BL	50ul	稀释缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备G6P标准品（G6P），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.在G6P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G6P工作溶液，以使G6P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G6P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（佳Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570nm）下监测荧光的增加。 注意：该板的内容物也可以转移到白色透明底板上，并通过吸光度酶标仪以A575nm / A605nm的比率进行读取。 与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。

 

参考文献

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产品名称	货号
Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒	Cat#13805