Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒

Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙氨酸的试剂盒，丙氨酸氨基转移酶（ALT），也称为血清谷氨酸丙酮酸转氨酶（GPT），是转移酶家族的成员。它催化丙氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移，是氨基酸代谢中的重要酶。 ALT主要存在于肝脏中，少量存在于心脏，肌肉和肾脏中。在健康受试者中，血清ALT水平低。然而，当细胞受损时，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黄疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能会渗入血流并且ALT水平显着升高。因此，测定血清ALT水平具有重要的临床和诊断意义。 Amplite 荧光丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒为各种生物样品中的ALT测量提供了一种快速而灵敏的方法。 ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸与丙酮酸和谷氨酸的反应。通过酶偶联反应循环产生红色荧光产物来测量产物谷氨酸。可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（佳Ex / Em = 540nm / 590nm）下读取信号。使用Amplite 荧光丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，在100μL反应体积中检测到低至4 mU / mL的ALT。该测定是稳健的，并且可以容易地适用于各种各样的应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒。 

 

适用仪器

---

荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备ALT工作溶液（50 µL）
2.加入ALT标准液或测试样品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至60分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 ALT标准溶液：
将100 µL DPBS加到ALT阳性对照（成分D）的小瓶中，制成100 U / mL ALT储备液。

 

2.标准溶液

ALT标准
将10 µL 100 U / mL ALT标准溶液加到含0.1％BSA的990 µL DPBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL ALT标准溶液（ALT7）。 取1000 mU / mL ALT标准溶液并进行1：3连续稀释，以得到ALT标准品（ALT6-ALT1）的连续稀释液。

 

3.工作溶液

3.1 NAD解决方案（100X）：
将100 µL ddH2O加入NAD小瓶（组分C）。

3.2 ALT酶混合物溶液：
将10 mL ALT分析缓冲液（组分B）添加到ALT酶混合物（组分A）瓶中，并充分混合。

3.3 ALT工作溶液：
将整个小瓶100X NAD溶液（从1）添加到ALT酶混合物溶液（从2）中，以得到ALT工作溶液。

注意：此ALT工作溶液足以容纳两个96孔板。 它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，并避免暴露在光线下。或者，可以通过将200μLH₂O加入组分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物储备溶液，然后通过将储备溶液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD溶液按比例混合来制备ALT工作溶液。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中的ALT标准品和测试样品的布局。 ALT = ALT标准（ALT1-ALT7，1至1000 mU / mL）; BL =空白对照； TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
ALT1	ALT1	...	...
ALT2	ALT2	...	...
ALT3	ALT3
ALT4	ALT4
ALT5	ALT5
ALT6	ALT6
ALT7	ALT7

表2.黑色96孔微孔板中ALT标准品和测试样品的布局

孔	容积	试剂
ALT1-ALT7	50ul	连续稀释（1至1000 mU / mL）
BL	50ul	DPBS with 0.1% BSA
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和表2提供的布局，将ALT标准品（ALT），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。 注意：如果需要，在含0.1％BSA的DPBS缓冲液中将测试样品稀释至合适的浓度范围（按ALT标准指示）。

2.在ALT标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL ALT工作溶液，以使ALT总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔微孔板，向每孔中加入25 µL ALT工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，在37°C下孵育反应30分钟至60分钟。 注意：空白控件的背景将随着时间而增加。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（佳Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下监测荧光的增加。

 

参考文献

Coexistence of non-alcoholic fatty liver disease with elevated alanine aminotransferase is associated with insulin resistance in young Han males
Authors: Wang R, Lu Q, Feng J, Yin F, Qin C, Liu B, Liu Y, Liu X.
Journal: Endocrine (2012): 70

Levels of Alanine Aminotransferase Confound Use of Transient Elastography to Diagnose Fibrosis in Patients with Chronic HCV Infection
Authors: Tapper EB, Cohen EB, Patel K, Bacon B, Gordon S, Lawitz E, Nelson D, Nasser IA, Challies T, Afdhal N.
Journal: Clin Gastroenterol Hepatol. (2012)

Pegylated interferon alpha-2b plus ribavirin for Japanese chronic hepatitis C patients with normal alanine aminotransferase
Authors: Kainuma M, Furusyo N, Azuma K, Kajiwara E, Takahashi K, Nomura H, Tanabe Y, Satoh T, Maruyama T, Nakamuta M, Kotoh K, Shimoda S, Hayashi J.
Journal: Hepatol Res (2012): 33

Association of serum alanine aminotransferase and gamma-glutamyltransferase levels within the reference range with metabolic syndrome and nonalcoholic fatty liver disease
Authors: Oh HJ, Kim TH, Sohn YW, Kim YS, Oh YR, Cho EY, Shim SY, Shin SR, Han AL, Yoon SJ, Kim HC.
Journal: Korean J Hepatol (2011): 27

Changes in serum levels of HBV DNA and alanine aminotransferase determine risk for hepatocellular carcinoma
Authors: Chen CF, Lee WC, Yang HI, Chang HC, Jen CL, Iloeje UH, Su J, Hsiao CK, Wang LY, You SL, Lu SN, Chen CJ.
Journal: Gastroenterology (2011): 1240

Ferritin/alanine aminotransferase ratio as a possible marker for predicting the prognosis of acute liver injury
Authors: Ozawa E, Abiru S, Nagaoka S, Yano K, Komori A, Migita K, Yatsuhashi H, Taura N, Ichikawa T, Ishibashi H, Nakao K.
Journal: J Gastroenterol Hepatol (2011): 1326

Gender differences in healthy ranges for serum alanine aminotransferase levels in adolescence
Authors: Poustchi H, George J, Esmaili S, Esna-Ashari F, Ardalan G, Sepanlou SG, Alavian SM.
Journal: PLoS One (2011): e21178

Non-alcoholic fatty liver disease's prevalence and impact on alanine aminotransferase associated with metabolic syndrome in the Chinese
Authors: Hou XH, Zhu YX, Lu HJ, Chen HF, Li Q, Jiang S, Xiang KS, Jia WP.
Journal: J Gastroenterol Hepatol (2011): 722

Nonalcoholic fatty liver disease is associated with blood pressure in hypertensive and nonhypertensive individuals from the general population with normal levels of alanine aminotransferase
Authors: Lopez-Suarez A, Guerrero JM, Elvira-Gonzalez J, Beltran-Robles M, Canas-Hormigo F, Bascunana-Quirell A.
Journal: Eur J Gastroenterol Hepatol (2011): 1011

Relationship of hepatic steatosis and alanine aminotransferase with coronary calcification
Authors: Targher G.
Journal: Clin Chem Lab Med (2011): 741

 

相关产品

产品名称	货号
Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 蓝色	Cat#13803