Amplite 比色法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光

Amplite 比色法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光是AAT Bioquest研发的用于检测半胱天冬酶活性的试剂盒。半胱天冬酶在细胞凋亡和细胞信号传导中起重要作用。胱天蛋白酶-3（CPP32 / apopain）的对于细胞凋亡的起始是重要的。 Caspase 3也被确定为筛选目标。胱天蛋白酶3对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。该Amplite™Caspase-3检测试剂盒使用（Z-DEVD）2R110作为荧光指示剂来测定caspase-3活性。半胱天冬酶对R110肽的切割产生强荧光的R110，可在510-530 nm荧光检测，激发488 nm荧光仪器中常用的激发光源。R110衍生的半胱天冬酶底物可能是用于荧光检测各种半胱天冬酶活性的敏感指标。Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光可以用于荧光酶标仪或荧光计连续测量细胞提取物和纯化酶制剂中半胱天冬酶-3的活性。它还可以与流式细胞术一起用于分析细胞凋亡和半胱天冬酶3和7的活性。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的Caspase 检测试剂/试剂盒。

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适用仪器

操作方法

1.用10μL10X测试化合物（对于96孔板）或5μL5X测试化合物（对于384孔板）处理细胞到PBS或所需缓冲液中。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在培养箱中孵育所需的一段时间以诱导细胞凋亡。

注意：我们用星形孢菌素（SS）在37℃处理Jurkat细胞4小时以诱导细胞凋亡，详细信息请参见图1。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7工作溶液。

4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。

5.在制动器关闭的情况下以800rpm离心细胞板2分钟。

6.用OD = 490nm的吸光度板读数器监测吸光度的增加。

数据分析

图1.检测Jurkat细胞中caspase 3/7活性。将细胞用浓度为0-1μM的星形孢菌素（SS）在37℃下处理4小时。处理后，将细胞与半胱天冬酶3/7测定溶液一起温育2小时。使用SpectraMax读数器（Molecular Devices）在490nm处测量吸光度。

参考文献

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