FITC-xtra 异硫氰酸荧光素

英文名称：FITC-xtra

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价格 2823
产品规格

5 mg

产品货号

荧光标记探针特优荧光标记染料 iFluor™ 染料和试剂盒合成试剂抗体标记氨基标记反应活性分类的探针胺基反应探针

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产品参数

Ex (nm)	498	Em (nm)	526
分子量	620.52	溶剂	DMSO
存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照

产品概述

FITC-xtra 异硫氰酸荧光素是美国AAT Bioquest生产的荧光素，虽然FITC是用于制备绿色荧光生物共轭物的流行的荧光标记染料，但是FITC存在某些限制，例如用于显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。与相应的FITC缀合物相比，用FITC-xtra制备的蛋白质缀合物是非常好的。FITC-xtra缀合物比FITC缀合物明显更亮，并且更加光稳定。另外，FITC-xtra的荧光不受pH（4-10）的影响。这种pH不敏感性是对FITC的重大改进，FITC仅在pH大于9时才发出其大荧光，FITC-xtra具有几乎相同FITC的光谱特性。此外，FITC-xtra在温和缀合条件下比FITC产生高得多的缀合产率。像5-FITC，FITC-xtra抗体缀合物适合于488nm激光线的激发，使其成为相应的FITC标记的抗体缀合物的替代物。在检测条件相同的情况下，FITC-xtra抗体缀合物提供比相应的FITC标记的缀合物高得多的信号/背景比。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的FITC-xtra 异硫氰酸荧光素。

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实验方案

实验方案

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（例如，1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（例如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合，得到1 mL蛋白标记储备液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2： 应将蛋白质溶于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注3：若使用不纯的抗体、牛血清蛋白（BSA）和明胶稳定的抗体，则标记效果不会特别好。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得标记结果。
注4：如果蛋白质浓度小于2mg / mL，则缀合效率明显降低。为获得标记效率，建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到FITC-xtra小瓶中以制备10-20mM储备溶液，通过移液或涡旋混合均匀。

注：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液B）随配随用，保证使用的溶液的新鲜。染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。

3.准备所需的蛋白质缀合物：

注：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 - 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到蛋白质的小瓶中溶液（95μl溶液A），有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2进行缀合反应。在有效摇动下将适量的染料储备溶液（溶液B）加入到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中。继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1; 如果需要，分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱或其他技术纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种缀合物的染料/蛋白质比（DOS）。

参考文献

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