胱天蛋白酶Caspase抑制剂 SRB-VAD-FMK(Sulforhodamine B-VAD-FMK)

胱天蛋白酶Caspase抑制剂 SRB-VAD-FMK(Sulforhodamine B-VAD-FMK)是美国AAT Bioquest生产的用于Caspase的试剂，SRB-VAD是一种红色荧光细胞渗透性胱天蛋白酶抑制剂，可靶向caspase 1,2,3,6,8,9或10.一旦进入细胞内，该抑制剂与活性caspase共价结合，产生绿色荧光。当添加到细胞群中时，SRB-VAD-FMK探针进入每个细胞并共价结合位于活性胱天蛋白酶异二聚体的大亚基上的反应性半胱氨酸残基，从而抑制进一步的酶活性。结合的标记试剂保留在细胞内，而任何未结合的试剂将扩散出细胞并被洗掉。绿色荧光信号是添加试剂时细胞中存在的活性半胱天冬酶量的直接量度。可以通过基于96孔板的荧光测定法，荧光显微术或流式细胞术分析含有结合的标记试剂的细胞。该探针具有与Cy3®和TRITC类似的光谱特性，因此Cy3®和TRITC的滤光片组可以方便地与流式细胞仪或显微镜一起使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的胱天蛋白酶Caspase抑制剂 SRB-VAD-FMK(Sulforhodamine B-VAD-FMK)。 

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样品操作及分析

以下方案仅提供指导，实际情况应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物检测胱天蛋白酶的常规方案

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光，或使用酶标仪监测吸光度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针检测细胞Caspase的方案

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）在Hanks中稀释DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X渗透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合（来自步骤2.3），并在37°C，5％CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定（仅适用于＃13470-13476）

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1：250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中（例如2 µL至500 µL细胞），并将细胞在37°C，5％CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

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