Buccutite APC-Cy5.5抗体标记试剂盒 标记100ug抗体

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产品优势  

高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

别藻蓝蛋白（APC）是一种红色荧光蛋白，其激发波长为651 nm，发射波长为662 nm。AAT Bioquest公司提供的Buccutite™快速标记试剂盒可高效实现APC-Cy5.5与抗体及链霉亲和素等蛋白试剂的偶联。该Buccutite™ APC-Cy5.5偶联试剂盒包含预活化APC-Cy5.5和反应缓冲液，为抗体-APC-Cy5.5偶联提供稳定便捷的解决方案，偶联产物可应用于流式细胞术、蛋白质印迹（WB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及免疫组化（IHC）等检测。每盒试剂可完成2次标记反应，每次最多标记100 μg抗体（具体抗体比例需通过实验优化）。该试剂盒采用预活化APC，相比传统的SMCC化学偶联法具有显著优势：1）即用型设计，偶联产率更高；2）通过蛋白质中丰富的氨基基团直接偶联（传统SMCC法需还原抗体再生巯基基团）。

实验方案

1.向100 µl抗体溶液中加入5 µl反应缓冲液（组分C）

2.抗体混合液加入Buccutite™ MTA冻干粉（组分B）

3.室温孵育30分钟

4.加入50 µl Buccutite™ FOL活化APC-Cy5.5（组分A）

5.室温继续孵育60分钟

 

重要保存说明：

1.试剂盒需4℃保存（有效期6个月），组分B可-20℃冻存

2.禁止冷冻组分A（活化APC-Cy5.5）与组分C（反应缓冲液）

3.使用前需室温平衡所有组分，短暂离心后立即配制工作液

注：本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。

 

抗体工作液配制

抗体浓度1 mg/mL时

取100 μL抗体溶液（含100 μg抗体）加入5 μL反应缓冲液（组分C，占总反应体积5%）

 

注意事项

1.浓度调整：若抗体浓度≠1 mg/mL，需调整体积确保投入~100 μg抗体

2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS，pH 7.2-7.4透析，或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器（Cat. # 60502 from AAT Bioquest）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）   

3.避免含BSA/明胶的抗体 

4.抗体浓度<1 mg/mL会显著降低Buccutite™ MTA反应效率

5.推荐工作浓度1-10 mg/mL

 

抗体-Buccutite™ MTA反应步骤

1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA（组分B）管中，通过反复吹吸或短暂涡旋（约5-10秒）充分混匀

2.室温（25±2℃）静置反应30-60分钟

注：可根据需求延长旋转或振荡孵育时间

 

抗体-APC-Cy5.5偶联制备

1.向Buccutite™ FOL活化APC-Cy5.5（组分A）管中加入50 μL超纯水（ddH₂O），吹吸或涡旋混匀至完全溶解

2.将全部复溶PE溶液加入抗体-MTA反应，室温旋转混合反应1小时

3.抗体-APC-Cy5.5偶联物现已准备好使用

注：如需立即使用，抗体-APC-Cy5.5偶联物需要稀释到您选择的缓冲液中。 

 

抗体-APC-Cy5.5偶联物保存

浓度要求：≥0.5 mg/mL（需添加0.1% BSA等载体蛋白）

短期保存：4℃避光（含2 mM叠氮钠可稳定2个月）

长期保存：冻干后≤-20℃储存

 

注意事项

避免反复冻融

使用前需离心去除潜在沉淀