Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，碱性磷酸酶是用于ELISA，免疫组织化学，Northern，Southern和Western印迹应用的高度灵敏的酶。 它广泛用于各种生物测定（特别是免疫测定）和基于ELISA的诊断。 这种Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒使用pNPP（一种生色磷酸酶底物）来定量溶液，细胞提取物以及固体表面（如PVDF膜）上的碱性磷酸酶活性。 该试剂盒通过我们优化的“混合和读取”测定方案提供所有必需组分，该方案与HTS液体处理仪器兼容。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	400nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
2.添加ALP工作溶液（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 - 30分钟
4.监测400nm处的吸光度增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 pNPP储备液（100X）：
将300μL蒸馏水加入pNPP小瓶（组分A）中。 好好混合。 应立即使用pNPP储备溶液。 注意：如果妥善保存，解决方案应该有效期为3-4周。

1.2 碱性磷酸盐标准溶液：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

 

2.标准溶液

碱性磷酸盐标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 然后取100μL的1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液进行1:10稀释，得到100 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。 然后进行1：3连续稀释以获得剩余标准品（AS6-AS1）。 注意：应丢弃未使用的稀释碱性磷酸酶标准溶液部分。

 

3.工作溶液

将50μLpNPP储备溶液（100X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.05mL的pNPP工作溶液。

 

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和白色/透明底96孔微孔板中的样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1至100 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.1至100 mU / mL）
BL	50ul	H2O-0.1％BSA
TS	50ul	测试样品

1.在上清液中：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸盐标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLpNPP工作溶液，使总碱性磷酸盐测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLpNPP工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。

1.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

2.在细胞中：

2.1根据需要处理细胞。

2.2将等体积的pNPP工作溶液加入每个细胞孔（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）中。 注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

参考文献

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