Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 绿色荧光

Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于乙酰胆碱酯酶的试剂盒,乙酰胆碱酯酶，也就是大家熟知的AChE。它是一种酶，降解（通过其水解活性）神经递质乙酰胆碱，产生胆碱和乙酸基团。它主要被发现在功能性神经肌肉和在神经系统的胆碱突触中，在此，它服务于终端突触传递。AChE具有很高的催化活性，每个AChE分子每秒能降解5000个分子的乙酰胆碱。乙酰胆碱酯酶也在红血细胞膜上被发现，组成Yt血抗原基团。乙酰胆碱酯酶存在多种分子形式，不同的形式具有类似的催化活性，但是他们之间的组装过程以及与细胞表面的黏附存在差异。Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 *绿色荧光* 为检测AChE活性提供了一种灵敏的方法。本试剂盒使用我们的Thiolite Green来对AChE水解乙酰胆碱形成的硫醇胆碱进行定量检测，Thiolite Green的绿色荧光强度与形成的硫醇胆碱成比例关系，因此可以反应AChE的活性。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒。 

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适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	490nm
Em:	525nm
Cutoff:	515nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备AChE工作溶液（50μL）
2.添加AChE标准品和/或AChE测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Thiolite Green原液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备200X Thiolite Green原液。

1.2 乙酰硫代胆碱原液（500X）：
将0.6mL ddH₂O加入乙酰硫代胆碱（组分C）的小瓶中。

1.3 乙酰胆碱酯酶标准储备液：
将100μL含0.1％BSA的ddH2O加入到乙酰胆碱酯酶标准品（组分D）的小瓶中，制成50U / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。

 

2.标准溶液

乙酰胆碱酯酶标准
将20μL的50U / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液加入到980μL测定缓冲液（组分C）中以产生1000mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。 取1000 mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液以1:10进行，得到100 mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液（AS7）。然后进行1：3连续稀释以获得剩余的连续稀释的乙酰胆碱酯酶标准品（AS6-AS1）。 注意：稀释的乙酰胆碱酯酶标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

 

3.工作溶液

将10μL乙酰硫代胆碱储备溶液（500X）和25μLThiolite Green储备溶液（200X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.03mL乙酰胆碱酯酶（AChE）工作溶液。 注意：AChE不稳定，需要在30分钟内使用，避光。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中乙酰胆碱酯酶标准品和测试样品的布局。 AS =乙酰胆碱酯酶标准品（AS1-AS7,0.01至100mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.01至100 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备乙酰胆碱酯酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向乙酰胆碱酯酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLAChE工作溶液，使总乙酰胆碱酯酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLAChE工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 490 / 520nm的荧光酶标仪监测荧光增加。

 

参考文献

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