Amplite 荧光酪氨酸酶检测试剂盒
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Amplite 荧光酪氨酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于酪氨酸的试剂盒，酪氨酸酶是一种在从细菌和真菌到动物的各种物种中表达的酶。酪氨酸酶对药物发现，生命科学研究，食品工业和化妆品工业具有重要意义，因为它在黑色素的生物合成途径中起重要作用。酪氨酸酶抑制剂的开发和筛选受到黑色素瘤相关疾病的极大关注。酪氨酸酶水平和活性在黑素瘤中高度上调，并且被认为是监测黑素瘤相关疾病的可靠测试。AAT Bioquest开发了Amplite 荧光酪氨酸酶检测试剂盒。它是一种简单，一步到位且可靠的检测方法，可以以非常高的灵敏度监测酪氨酸酶活性。该测定使用专有的荧光底物，其在与酪氨酸酶反应时明显增加其在440nm处的荧光强度。440nm处荧光强度的增加与酪氨酸酶活性密切相关。该测定试剂盒设计用荧光酶标仪进行运行。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光酪氨酸酶检测试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 340nm |
| 发射： | 440nm |
| cutoff: | 420nm |
| 推荐孔板： | 黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备和添加标准品和样品（50μL）
2.准备并添加酪氨酸酶蓝工作溶液到标准品和样品孔（50μL）
3.将板在室温下孵育60至120分钟
4.检测Ex / Em = 340 / 440nm处的荧光强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1酪氨酸酶原液（2000 U / mL）：
将120μL测定缓冲液（组分B）加入酪氨酸酶标准品（组分A）中并充分混合。 注意：将未使用的酪氨酸酶原液储存在-20°C，一次性使用等分试样。
1.2酪氨酸酶蓝原液（100X）：
将50μLDMSO（组分D）加入酪氨酸酶蓝（组分C）中并充分混合。 注意：将未使用的酪氨酸酶蓝原液在-20°C下以一次性等分试样储存。
2.标准溶液
酪氨酸酶标准
使用酪氨酸酶原液（2000 U / mL）和测定缓冲液产生400 U / mL终浓度的酪氨酸酶标准溶液（T1）。 然后进行1：2连续稀释以获得剩余的连续稀释的酪氨酸酶标准品（T2-T7）。 注意：井中标准品的最终浓度为2X。 注意：使用提供的标准，如果使用建议的浓度，可以重复生成2条标准曲线。
3.工作溶液
酪氨酸酶蓝工作溶液：
通过将5μL酪氨酸酶蓝原液（100X）加入1mL测定缓冲液（组分B）中进行1：100稀释并充分混合。
样品分析
| T1 | T1 | TS | TS |
| T2 | T2 | ||
| T3 | T3 | ||
| T4 | T4 | ||
| T5 | T5 | ||
| T6 | T6 | ||
| T7 | T7 | ||
| T8 | T8 |
表1.白色透明底96孔微孔板中酪氨酸酶标准品和测试样品的布局。 酪氨酸酶标准品（TS1-TS8 = 200至0U / mL），TS =测试样品
1.以下协议可用作指南，应根据需要进行优化。
2.根据测定缓冲液中的建议制备标准品和测试样品，分别加入50ul到微孔板中。
3.将50μL酪氨酸酶蓝工作溶液加入标准品和样品的孔中。
4.将反应在37℃孵育60至120分钟。 注意：反应可保持长达6小时。
5.用荧光读板仪在Ex / Em = 340 / 440nm处监测荧光强度，截止值= 420nm。
参考文献
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