Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒 增强灵敏度

Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测超氧化物歧化酶的试剂盒，超氧化物歧化酶（SOD）是一类催化超氧化物歧化成氧和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧物质之一。它与神经退行性疾病，缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化和衰老相关。 SOD是几乎所有暴露于超氧自由基的细胞的重要抗氧化防御剂。事实上，缺乏SOD1的小鼠会发展出多种病理，包括肝细胞癌，加速年龄相关的肌肉质量减少，早期白内障发病率和寿命缩短。 SOD的过表达保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。 Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒为测量SOD活性提供了一种快速而灵敏的方法。众所周知，NADH和SOD酶系统产生超氧自由基，将WST-1还原成蓝色甲dye染料，其在440nm附近具有最大吸收。 SOD通过催化超氧阴离子歧化成过氧化氢和分子氧来抑制WST-1的还原，从而降低了甲product产物的440nm吸收。 440nm吸收的减少与SOD活性成比例。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒。 

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加SOD标准品或测试样品（50μL）
2.添加SOD工作溶液1（25μL）
3.添加SOD工作溶液2（25μL）
4.在室温下孵育30-60分钟
5.监测440nm处的吸光度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1SOD标准溶液（10 kU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到SOD标准品（组分D）的小瓶中以制备10kU / mL标准溶液。

 

2.标准溶液配制
将10μL10kU / mL SOD标准溶液加入990μL分析缓冲液（组分E）中，得到100 U / mL SOD标准溶液（SD1）。 取100 U / mL SOD标准溶液（SD1），在分析缓冲液（组分E）中进行1:10，得到10U / mL SOD标准溶液（SD2）。 取10 U / mL标准溶液（SD2）并进行1：3连续稀释，以获得使用分析缓冲液（组分E）的连续稀释的SOD标准品（SD3-SD7）。

 

3.工作溶液配制

3.1 SOD工作溶液方案1：
将2.5mL测定缓冲液（组分E）加入WST-1瓶（组分A）中并充分混合。 然后将50μL50XSOD酶溶液（组分B）加入该瓶中以制备SOD工作溶液1.注意：该SOD工作溶液1应在实验前制备，并避光。 SOD工作溶液1不稳定，应丢弃未使用的部分。

3.2 SOD工作溶液方案2：
将50μL测定缓冲液（组分E）加入到NADH小瓶（组分C）中并充分混合。 然后，将50μL的NADH储备溶液转移到2.5mL测定缓冲液（组分E）中以制备SOD工作溶液2。

 

操作步骤

表1.透明底96孔微孔板中SOD标准品和测试样品的布局。

SD = SOD标准品（SD1  -  SD7,100至0.041 U / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

 

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释（100至0.041 U / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分E）
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备SOD标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液1，使总测定体积为75μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液1，总体积为37.5μL/孔。

3.向SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液2，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液2，总体积为50μL/孔。

4.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

5.用吸光度板读数器在440nm处监测吸光度。

 

数据分析

        将从空白标准孔获得的读数（抑制％）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算SOD样本。 

图1.使用Amplite 比色超氧化物歧化酶测定试剂盒在96孔白壁/透明底板中用Spectrum Max酶标仪（Molecular Devices）测量OD剂量响应。

 

参考文献

Accelerated sarcopenia in Cu/Zn superoxide dismutase knockout mice
Authors: S. S. Deepa
Journal: Free Radic Biol Med (2019): 19-23

Carcinogenesis and Reactive Oxygen Species Signaling: Interaction of the NADPH Oxidase NOX1-5 and Superoxide Dismutase 1-3 Signal Transduction Pathways
Authors: A. Parascandolo
Journal: Antioxid Redox Signal (2019): 443-486

Evaluation and Monitoring of Superoxide Dismutase (SOD) Activity and its Clinical Significance in Gastric Cancer: A Systematic Review and Meta-Analysis
Authors: J. Li
Journal: Med Sci Monit (2019): 2032-2042

The copper-zinc superoxide dismutase activity in selected diseases
Authors: L. Lewandowski
Journal: Eur J Clin Invest (2019): e13036

Utilizing Superoxide Dismutase Mimetics to Enhance Radiation Therapy Response While Protecting Normal Tissues
Authors: K. A. Mapuskar
Journal: Semin Radiat Oncol (2019): 72-80

A Review of the Catalytic Mechanism of Human Manganese Superoxide Dismutase
Authors: J. Azadmanesh
Journal: Antioxidants (Basel) (2018): se name="11308.enl" path="C:\Users\aatbi\Dropbox (AAT Bioquest)\Website Working Files\Product References\11308.enl">11308.enlEndNote101017Azadmanesh, J.Borgstahl, G. E. O.Department of Biochemistry and Molecular Biology, 985870 Nebraska Medical Center, Om

Chemical Warfare at the Microorganismal Level: A Closer Look at the Superoxide Dismutase Enzymes of Pathogens
Authors: S. S. Schatzman
Journal: ACS Infect Dis (2018): 893-903

Human Mn-superoxide dismutase inactivation by peroxynitrite: a paradigm of metal-catalyzed tyrosine nitration in vitro and in vivo
Authors: V. Demicheli
Journal: Metallomics (2018): 679-695

Inhibition of copper-zinc superoxide dismutase activity by selected environmental xenobiotics
Authors: L. Lewandowski
Journal: Environ Toxicol Pharmacol (2018): 105-113

Superoxide dismutase: a review and a modified protocol for activities measurements in rat livers
Authors: L. B. Campos-Shimada
Journal: Arch Physiol Biochem (2018): 1-8

 

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产品名称	货号
Amplite 比色法超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒	Cat#11305