Amplite 荧光法丙二醛（MDA）定量试剂盒

Amplite 荧光法法丙二醛（MDA）定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。丙二醛（MDA）和4-羟基壬烯醛（4-HNE）是脂质过氧化的天然副产物。 作为脂质过氧化受欢迎和可靠的生物标志物，MDA已被广泛用于确定临床情况下的氧化应激多年。 因此，MDA的量化对于评估病理生理过程中的氧化应激是必不可少的。 Amplite 荧光丙二醛（MDA）定量试剂盒提供了一种快速方便的方法来测量MDA，无需加热步骤，而这些步骤是其他供应商提供的商业MDA检测试剂盒所必需的。 Monoaldelite Blue本身几乎不发荧光，但在与MDA反应时会产生强烈的蓝色荧光。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法法丙二醛（MDA）定量试剂盒。 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	365nm
Em：	435nm
cutoff:	420nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备并添加MDA标准品或测试样品（50μL）
2.准备并添加MDA工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育10至30分钟
4.加入反应溶液（25μL）
5.在室温下孵育30至60分钟
6.监测Ex / Em = 365 / 435nm处的荧光强度

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 MDA标准溶液（100 mM）：
将100μLddH2 O加入到MDA标准品（组分C）的小瓶中以制备100mM MDA标准溶液。

1.2 Monoaldelite Blue原液（250X）：
将20μLDMSO（组分E）加入一小瓶Monoaldelite Blue（组分A）中以制备Monoaldelite Blue原液。 注意：这种Monoaldelite Blue原液足以容纳一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

 

2.标准溶液

2.1MDA标准
将10μL的100mM MDA标准溶液加入990μL的测定缓冲液（组分B）中以产生1000μM的MDA标准溶液（MDA7）。 取1000μMMDA标准溶液（MDA7）并进行1：3连续稀释，得到连续稀释的MDA标准品（MDA6-MDA1）和分析缓冲液（组分B）。

 

3.工作溶液

Monoaldelite 蓝色：
将20μL250XMonoaldelite Blue储备溶液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中MDA标准品和测试样品的布局。 MDA = MDA标准品（MDA1-MDA7,1.37至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MDA1	MDA1	...	...
MDA2	MDA2	...	...
MDA3	MDA3
MDA4	MDA4
MDA5	MDA5
MDA6	MDA6
MDA7	MDA7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
MDA1-MDA7	50ul	连续稀释液（1.37至1000μM）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局添加MDA标准品（MDA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向MDA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMDA工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLMDA工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10-30分钟。

4.向每个孔中加入25μL反应溶液（组分D），使总测定体积为125μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μL反应溶液（组分D），总体积为62.5μL/孔。

5.在室温下孵育反应30-60分钟。

6.用Ex / Em = 365 / 435nm（截止= 420nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

 

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