Amplite 比色法丙二醛（MDA）定量试剂盒

Amplite 比色法丙二醛（MDA）定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。丙二醛（MDA）是脂质过氧化的天然副产物，被广泛用作确定氧化应激和自由基形成的关键指标。 历史上，MDA的测量依赖于与硫代巴比妥酸（TBA）的反应，得到可以在532nm下比色测量或在Ex / Em = 530nm / 550nm下荧光测定的化合物。 但该测定不是MDA特异性的，也是在90-100℃的酸性条件下进行的。 已经有许多商业ELISA试剂盒，这使得它更加昂贵和繁琐。 Amplite 比色丙二醛（MDA）定量试剂盒提供了快速，方便的MDA测量方法，无需TBARS加热步骤。 MDA Blue 与MDA反应生成蓝色产物，用吸光度酶标仪在695nm处测量。 该测定法对MDA非常快速且特异，几乎不受其他醛的干扰。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法丙二醛（MDA）定量试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	695nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品和连续稀释的MDA标准品（50μL）
2.添加MDA Blue 原液（10μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.加入反应溶液（40μL）
5.监测OD增加至695nm

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. MDA标准溶液（100 mM）：
将100μLDdH2O加入MDA标准小瓶（组分C）中以制备100mM MDA储备溶液。

 

2.标准溶液

2.1MDA标准
将4μL100mMMDA标准品加入996μL稀释缓冲液（组分B）中，得到400μMMDA溶液（MDA7）。 然后在稀释缓冲液中进行1：2连续稀释，得到连续稀释的MDA标准品（MDA6-MDA1）。

  

样品分析

表1. 96孔透明底微孔板中MDA标准品和测试样品的布局。 MDA = MDA标准品（MDA1-MDA7,6.25至400μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MDA1	MDA1	...	...
MDA2	MDA2	...	...
MDA3	MDA3
MDA4	MDA4
MDA5	MDA5
MDA6	MDA6
MDA7	MDA7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
MDA1-MDA7	50ul	连续稀释（6.25至400μM）
BL	50ul	稀释缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备MDA标准品（MDA），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.将10μLMDABlue （组分A）溶液加入MDA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中。 对于384孔板，每孔使用5μLMDABlue 溶液。

3.将反应混合物在室温下孵育10-30分钟。

4.加入40μL反应溶液（组分D），使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，使用20μL反应溶液，总测定体积为50μL/孔。

5.将终反应混合物在室温下孵育30-60分钟。

6.用吸光度板读数器监测吸光度增加，在OD为695~700nm时进行路径校正校正。

 

参考文献

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