Amplite 比色法氨定量试剂盒

Amplite 比色法氨定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。氨是生命系统重要的氮源。它是通过氨基酸代谢合成的，高浓度时有毒。它在肝脏中产生并通过尿素循环转化为尿素。血液中氨水平升高（高氨血症）与肝功能障碍（肝硬化）有关，而低氨血症则与尿素循环酶（例如鸟氨酸转氨甲酰酶）缺陷有关。氨的测定是临床实验室监测健康状况非常有用的测试。我们的 Amplite® 比色氨测定试剂盒提供了一种简单而灵敏的比色方法，用于定量食品和生物样品（例如血清、血浆和尿液等）中的氨浓度。该测定基于测定中氨的酶偶联反应缓冲，最后产生蓝色产物。产生的颜色强度与样品中氨的浓度成正比，可以在 660-670 nm 处进行比色测量。该 Amplit® 比色氨检测试剂盒提供了一种简单的氨检测方法。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法氨定量试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	660-670nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备氯化铵标准品或测试样品（50μL）
2.添加分析缓冲液I（50μL）
3.在室温或37°C孵育5分钟
4.添加分析缓冲液II（50μL）
5.在室温下孵育30-60分钟
6.监测吸光度增加到660 - 670 nm

 

溶液制备 

1.标准溶液

1.1氯化铵标准
将1μL1.0M氯化铵标准品（组分C）加入999μLDPBS中，生成1000μM氯化铵标准溶液（AS7）。 取1000μM氯化铵标准溶液（AS7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的氯化铵标准品（AS6-AS1）和DPBS。

 

 

样品分析

表1.在96孔微孔板中的氯化铵标准品和测试样品的布局。 AS =氯化铵标准品（AS1-AS7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释液（1至1000μM）
BL	50ul	DPBS
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备氯化铵标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向每个氯化铵标准品，空白对照和测试样品的孔中加入50μL测定缓冲液I（组分A），使总测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL测定缓冲液I，总体积为50μL/孔。

3.将反应在室温或37℃下孵育5分钟。

4.向每个孔中加入50μL测定缓冲液II（组分B）以使总测定体积为150μL/孔。对于384孔板，每孔加入25μLAssayBuffer II，总体积为75μL/孔。

5.在室温下孵育反应30-60分钟。

6.用吸光度酶标仪在660-670nm处监测吸光度的增加。注意：加入分析缓冲液II（组分B）后颜色变为黄色，含氯化铵标准品的孔或样品孵育后会显示蓝绿色。颜色的强度将在30-60分钟内达到大值。

 

参考文献

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